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圆环防控新理念

【发布时间：2016-05-18 】【点击次数：58 】【所属分类：技术服务建设】

2014年7月至2015年底的疾病检出率
为什么在免疫场中圆环久防不住？

（1）圆环盲检率达33%
（2）临床不发病，但仍有散毒
（3）毒株有变异，PCV2d型毒株开始出现
致病力更强的PCV2d型的病毒毒株开始出现

适者生存

是否是疫苗加速了变异？可能的原因是疫苗没有切断病原的传播

1、圆环病毒的水平传播途径
水平传播途径---粪便排毒，仔猪哺乳期通过母猪感染；
水平感染途径---仔猪经呼吸道肠道等黏膜途径感染；
病毒繁殖产所---前期在黏膜中繁殖，后期感染至脏器；
黏膜（呼吸道、肠道上皮）是圆环病毒感染与防控的第一关
2、目前的防控手段---消毒剂无效，病毒循环期长
抵抗力较强：耐高温，耐酸碱；
在猪粪中存活6个月仍具有感染性
----猪病学第十版
圆环为无囊膜病毒，对消毒剂和有机溶剂不敏感
粪便中的圆环病毒来自于肠道感染，不能清除肠道中的病原则无法降低猪场的感染压力
3、灭活疫苗无法清除肠道中的圆环病毒
世界公认疫苗是控制圆环病毒病的有效方法之一；
灭活苗的理论基础：

产生的抗体进入血液循环，阻止圆环病毒通过血液循环感染脏器；

4、体液免疫的局限性
体液免疫对圆环病的防控治标不治本：
1、抗体主要为IgG，无法清除肠道中的PCV病毒；
2、产生作用较慢，需要30天以上才能建立保护；
3、空窗期长，50日龄前仔猪无主动的黏膜保护；
目前免疫场的问题---病原循环感染期长
（1）圆环病毒耐性强，猪场存活期长；
（2）体液免疫起效迟缓，存在空窗期；
（3）难以切断病毒通过口鼻途径传播；

体液免疫治标不治本，
仔猪在哺乳期通过母猪排毒感染，哺乳期仔猪的感染压力，决定了保育期的生长效率
降低哺乳仔猪的感染压力需要黏膜免疫

机体50%以上的淋巴组织位于粘膜系统
包括消化道、呼吸道、泌尿生殖道表面
起效快，2h-3天产生抗体，5-7天建立保护
SIgA是主要的保护性抗体，进入黏膜系统循环

#p#副标题#e#

滴鼻免疫

伪狂犬的滴鼻免疫
支原体的喷鼻免疫

滴鼻免疫优点

避开母源抗体的干扰
滴鼻后快速建立有效的黏膜免疫，封闭野毒感染的门户
在急性感染期可以有效控制PRV的复制和排毒过程
针对伪狂犬最有效的接种方式为滴鼻免疫，在获得性被动免疫存在的情况下，鼻内接种的方法优于肌肉注射

--------《猪病学》第9版中文版第475页
体液免疫与黏膜免疫的区别

黏膜与体液免疫各有优势，不相互影响，不能相互替代；
黏膜免疫适用于快速建立保护，降低病原通过黏膜感染的机率；
体液免疫发挥作用慢，可建立较为坚实的保护，对于育肥期发挥更为重要的作用
圆环全防卫---降低感染压力
体液免疫：

降低母猪病毒血症，切断垂直传播
为仔猪特别是育肥期建立持久保护

黏膜免疫：

降低母猪肠道排毒，降低排毒机率
快速建立黏膜免疫降低被感染可能

理念：通过口服加注射，全防卫防控圆环，切断感染源，降低感染压力；

由英国皇家科学院开发，口服使用，刺激机体产生IgA，可显著降低圆环的排毒，降低感染压力；
乳酸菌（lactic acid bacteria，LAB）是一类定植于肠道、能利用碳水化合物产生大量乳酸的革兰氏阳性菌的总称，已在世界范围内被公认为“Generally Recognized as Safe（GRAS）”等级的食品微生物。

乳酸菌疫苗的优势

安全性高；
具有免疫佐剂的作用，提高抗原免疫原性；
高效表达；
在体内定植，保持蛋白的表达活性，缓释效应；

乳酸菌疫苗具有佐剂效应
乳酸菌（以金黄葡萄球菌例）能够有效刺激NK细胞产生细胞因子。

乳酸菌疫苗具有佐剂效应
乳酸菌与单核细胞协同作用，激活NK细胞活性。

乳酸菌疫苗具有佐剂效应

总结：乳酸菌能够诱导NK细胞产生INF-γ等相关免疫因子，提高免疫球蛋白水平，调节机体免疫状态，无关乳酸菌的活性。
抗原高效表达
Martin 等人将nisRK 整合进L. casei
ATCC393 染色体中, 以β-葡糖醛酸酶(g us)基因作为报告基因, 构建了食品级NICE 系统。
将引起人胃肠炎的Norwalk 病毒的主要抗原蛋白VP60 结构蛋白基因置于nisA 启动子的下游,成功地高效表达了抗原蛋白VP60。

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乳酸菌的益生功能

防治乳糖不耐症

防治腹泻
微生态制剂治疗法：益生菌与肠出血大肠杆菌、霍乱弧菌等致病菌竞争在人肠上皮细胞上的黏附位点，通过生物拮抗抑制肠道致病菌的生长和代谢活性，调节肠道菌群组成来发挥治疗作用。

乳酸菌的益生功能
微生态制剂治疗法：益生菌与肠出血大肠杆菌、霍乱弧菌等致病菌竞争在人肠上皮细胞上的黏附位点，通过生物拮抗抑制肠道致病菌的生长和代谢活性，调节肠道菌群组成来发挥治疗作用。
乳酸菌的益生功能

防治消化性溃疡

幽门螺杆菌感染是消化性溃疡的主要致病原因。乳酸菌中嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌等分泌物能够有效抑制幽门螺杆菌的生长，其中干酪乳杆菌竞争结合胃黏膜上皮细胞结合位点，加氏乳杆菌产生D-L乳酸诱导幽门螺杆菌休眠。

抑制致病菌

乳酸菌产生的乳酸、H2O2、细菌素具有广谱抑菌作用。

增强免疫

乳酸菌可通过增强单核吞噬细胞（单核细胞和巨噬细胞）、多形核白细胞的活力，刺激单核因子等效应分子产生，促进非特异性免疫系统活性。
乳酸菌疫苗应用

乳酸工程菌平台---圆环Cap蛋白表达载体
益生菌为载体，携带通过胃肠酸性环境；
定植肠道，激活黏膜免疫系统；
兼具亚单位和DNA疫苗作用
封闭水平感染途径

实验验证
1.1 主要保护性蛋白CAP蛋白含量
（1）材料与方法
根据西班牙INGEZIM PCV DAS 猪圆环（PCV2）双抗夹心ELISA抗原检测试剂盒检测圆环试验所用的样品。
将每份检测样品按1：1、1：5、1：25、1：50、1：100、1：200、1：400、1：800进行倍比稀释，加入到加样孔中；孵育洗涤后加入结合物（抗PCV2核蛋白单抗-HPPO），孵育洗涤显色，于酶标仪检测OD450值